Preñeces equinas a partir de blastocistos equinos expandidos, vitrificados mediante colapso manual en un sistema de micro-pozos

Abstract

En el presente trabajo se estudió una nueva metodología de punción manual y colapso de embriones equinos de gran tamaño mediante la utilización de una microaguja y un sistema de inmovilización en placas de Petri con micro-pozos, con el objetivo de mejorar la supervivencia a la criopreservación en condiciones que podrían implementarse a campo. De manera preliminar, se probaron tres métodos de inmovilización con el objetivo de sostener los embriones y poder colapsarlos sin necesidad de utilizar un sistema complejo de micromanipulación, utilizando para ello ovocitos bovinos obtenidos a partir de ovarios post-mortem. Luego, se recuperaron 6 embriones equinos de gran tamaño (>900 μm en promedio) mediante la técnica de inseminación artificial y lavaje uterino, y se optó por el sistema de micro-pozos en placas de Petri como soporte de inmovilización más indicado, y microagujas de 32 g de cinco puntas combinadas con pipeteo forzado (MN-FP) para el colapso previo a la vitrificación, incluyendo también un sistema de micromanipuladores y microinyectores (MA) como control. Se evaluó el porcentaje de colapso de los embriones con cada técnica, y la posterior supervivencia in vitro e in vivo de los embriones post-calentamiento.